Uma vacina geneticamente preparada com o gene da glicoproteína D do herpesvirus bovino-1.2a (BHV-1.2a) controlado com o promotor/potenciador imediatamente precoce de citomegalovírus foi administrada no pescoço de ovinos. Todos os animais produziram anticorpos séricos que reconheceram, em ELISA, o antígeno homólogo (BHV-1.2a, amostra BH-83) e também mostraram reatividade cruzada contra um antígeno heterólogo (BHV-5 amostra EVI-190). Foram aplicadas três inoculações, mas não houve melhora de resposta com a terceira inoculação. Resposta específica contra BHV-1.2a foi detectada pelo menos até 12 meses após a primeira inoculação, entretanto, a resposta sorológica contra o BHV-5 foi de menor intensidade e duração do que aquela contra o BHV-1.2a.

A genetic vaccine consisting of the bovine herpesvirus-1.2a (BHV-1.2a) glycoprotein D (gD) gene under the control of the cytomegalovirus immediate-early promoter/enhancer was generated and administered to sheep intramuscularly in the neck. All animals developed serum antibodies which recognized the homologous antigen (BHV-1.2a strain BH-83) and also exhibited cross-reactivity against the heterologous antigen (BHV-5 strain EVI-190). Three intramuscularly injections were given but serological responses were not improved after the second inoculation. Specific antibodies were detected against BHV-1.2a until at least 12 months after the first inoculation. However, the capacity to induce antibodies against BHV-5 was lower and of shorter duration than to BHV-1.2a.

Uma amostra brasileira do vírus da doença de Aujeszky, isolada de um leitão, foi estudada quanto à virulência para suínos e seu genoma analisado no que se refere ao padrão de fragmentação pela enzima de restrição Bam HI. Leitões com 50 dias de idade, sorologicamente negativos, expostos a essa amostra, não mostraram sinais de doença e o vírus foi detectado na região orofaríngeana durante pelo menos três dias após exposição. Com base no padrão de migração dos fragmentos de restrição, o isolamento foi classificado como pertencente ao grupo I da classificação proposta por Herrmann. Infecção latente foi detectada por PCR em todos os suínos. Algumas variações foram identificadas no mapa físico de Bam HI da amostra ASB Piau quando se comparou com o mapa obtido da amostra virulenta brasileira LA031.

One Brazilian strain of Aujeszky’s disease virus isolated from a piglet in which the disease had not been observed was studied as for its virulence in pigs. The genome of the virus was molecularly analysed as for their restriction endonuclease cleavage pattern. Fifty-day-old non-immune weanlings exposed to this strain showed no disease although the virus was present in their oropharyngeal area for at least three days. All animals developed moderate titers of neutralizing antibody. Based on number of bands and migration rate of restriction fragments the isolate was classified into Herrmann’s type I group. Latent infection was detected in all pigs by PCR. Some variations were detected in the cleavage pattern of the strain ASB Piau when compared to LA031 virulent Brazilian strain, that could be related to differences in the virulence.

Desenvolveu-se a técnica de transcrição reversa - reação em cadeia pela polimerase para detectar o vírus da hepatite do camundongo em tecido hepático. Para se eliminar possíveis falhas na reação de amplificação RT-PCR usou-se um segundo ciclo de amplificação com primers internos para confirmar a especificidade e aumentar a sensibilidade do teste. Após a optimização do protocolo, descreve-se a detecção da amplificação específica da seqüência-alvo em camundongos de 18 das 20 colônias examinadas.

A reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) to detect mouse hepatitis virus (MHV) in hepatic tissue was developed. To circumvent possible failures in RT-PCR amplifications, a second round of PCR with internal primers was used to confirm the specificity and increase the sensitivity of the test. Using this method specific amplification of MHV sequences was observed in 18 out of 20 mouse colonies examined.

Uma sonda radioativa e uma outra biotinilada foram produzidas para detecção do vírus da doença de Aujeszky (VDA). O fragmento de Bam H I 7 do DNA genômico do VDA foi marcado por "nick translation" empregando P32dCTP e um fragmento de 196pb, resultante de uma amplificação pela reação em cadeia pela polimerase marcado com biotina 7-dATP. Essas sondas, de uma maneira rápida e específica, prestaram-se para a detecção da infecção aguda pelo VDA. Entretanto, não se mostraram sensíveis o suficiente para detectar seqüências genômicas de VDA no gânglio trigêmio de suínos e camundongos com infecção latente.

A DNA hybridization dot-blot assay using a radioactive and a non-radioactive probe has been developed for the detection of Aujeszky's disease virus (ADV). The Bam H I 7 fragment of ADV genomic DNA was labeled by nick translation using 32P-dCTP and the 196bp polymerase chain reaction (PCR) gG glycoprotein gene amplified fragment was also labeled by nick translation but using biotin d-7-dATP. This technique provides a fast and effective means of detecting acute cases of ADV infection but it was unable to detect ADV nucleic acid sequences in trigeminal nerve ganglia of latent infected pigs and mice.

A técnica da reação em cadeia pela DNA polimerase (PCR) foi usada para a amplificação rápida de um fragmento de 456bp da região única curta (Us) do genoma do BHV-1. Iniciadores de 18pb do gene da ORF1 foram usados para a amplificação das amostras-padrão e brasileiras. Uma amplificação clássica não foi bem sucedida. A amplificação foi obtida quando se escolheu uma região com baixa concentração de GC no DNA do BHV-1 e através da desnaturação térmica (95° C para 5min) seguida de ciclos térmicos (94° C por 1min e 30seg; 52° C por 1min; 72° C por 1min e 30seg; e ainda por 35 ciclos de 94° C por 1min; 52° C por 1min; 72° C por 1min e 30seg; usando um tempo de extensão final de 72° C por 5min). A clivagem com Pst I confirmou a especificidade do fragmento da ORF 1 do BHV-1. A amplificação do fragmento em todas as amostras testadas sugere que a região é fortemente conservada no genoma do BHV-1. Este PCR poderá detectar rapidamente amostras clínicas, sendo sensível e específico para diagnosticar infecções pelo BHV-1.

DNA-based immunization has initiated a new era of vaccine research. One of the main goals of gene vaccine development is the control of the levels of expression in vivo for efficient immunization. Modifying the vector to modulate expression or immunogenicity is of critical importance for the improvement of DNA vaccines. The most frequently used vectors for genetic immunization are plasmids. In this article, we review some of the main elements relevant to their design such as strong promoter/enhancer region, introns, genes encoding antigens of interest from the pathogen (how to choose and modify them), polyadenylation termination sequence, origin of replication for plasmid production in Escherichia coli, antibiotic resistance gene as selectable marker, convenient cloning sites, and the presence of immunostimulatory sequences (ISS) that can be added to the plasmid to enhance adjuvanticity and to activate the immune system. In this review, the specific modifications that can increase overall expression as well as the potential of DNA-based vaccination are also discussed.